尿素氮(BUN)含量測定試劑盒(二乙酰肟顯色法)
產品說明:
尿素是體內蛋白質分解代謝的含氮終產物,構成了血液中絕大部分的非蛋白氮。尿素產生于肝臟, 經腎臟排泄至尿中,其含量取決于蛋白質攝入量,蛋白質分解代謝和腎功能。血清(漿)中尿素測定是臨床中反映腎小球濾過功能的常用指標。試劑盒采用二乙酰肟顯色法,操作簡單,特異性強,重復性佳,線性范圍 0.03-14mmol/L。
原理:
根據 Fearon 反應,在強酸性和加熱條件下,尿素與二乙酰一肟縮合生成紅色的二嗪衍生物,在540nm處有最大吸收峰,光密度值在一定范圍內與尿素含量成正比。
適用:
血清、血漿 、尿液
組成:(微孔測定 300 個樣本,1cm 比色杯 100 個樣本)
R1 試劑 50ml
R2 試劑 5ml
16mM 尿素標準品 0.5ml
以上組分 4℃保存, 12 個月有效
所需設備:
酶標儀、721、722 型可見光分光光度計。最佳工作波長 540nm,如無此波長建議選用 520nm。
操作步驟:
一、工作液配制:將 R1 試劑與 R2 試劑按 10:1 的比例混合均勻,現配現用。
二、標準品稀釋:將 16mM 標準品用蒸餾水倍比稀釋為 8、4、2、1、0.5、0.25、0.125mM 通常取 8、4、2、1、0.5mM 五個點即可,注意設置 0 濃度空白對照。
三、尿素濃度測定
(1) 參照下表加樣,充分混勻(可按比例調整整體上樣量)。
尿液樣本建議稀釋 1:10—1:50 倍,若超出線性范圍,需再稀釋。
酶標板測定加樣比例 | 1 ml 比色杯測定的加樣比例 | |||||
空白管 | 標準品 | 樣本管 | 空白管 | 標準品 | 樣本管 | |
蒸餾水 μl | 3 | 10 | ||||
標準品 μl | 3 | 10 | ||||
樣品 μl | 3 | 10 | ||||
工作液 μl | 165 | 165 | 165 | 550 | 550 | 550 |
(2) 請使用耐高溫管于 100°C 沸水浴或金屬浴中孵育 15min。立即冷水冷卻 5min。反應平衡后,30min內顏色穩定。
(3) 使用酶標儀或可見光分光光度計,540nm 空白管調零后,進行測定。
(4) 以 OD 值為 y 軸,尿素濃度為 x 繪制標準曲線并計算尿素濃度。
說明:
(1) 目前實驗研究中,已基本采用直接測定尿素濃度反應腎臟濾過功能,試劑盒測定的數值即為尿素濃度,單位為mmol/L。
(2) 正常血清尿素濃度參考值 2.86~8.20 mmol/L。
(3) 尿素氮是指尿素分子氨基中的N 含量(blood urea nitrogen, BUN),檢測結果多用 mg/dl 為單位,尿素和尿素氮換算公式:
尿素 mg/dl*0.1665=尿素 mmol/L
尿素 mg/dL *(28.02/60.60)=BUN mg/dL
(4) 試劑盒僅限于科研,操作時請佩戴手套。
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