注 意：

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 

測定意義： 

胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。 

測定原理： 

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。 

自備儀器和用品：

 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 

試劑組成和配制： 

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 10mL 試劑二充分溶解。 

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 10mL 蒸餾水充分溶解。 

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 15mL 蒸餾水充分溶解。 

試劑六：液體 3.3mL×1 瓶，4℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1.27mL×1 支，0.5μmol/mL 酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 4℃保存。 

粗酶液提取：組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即粗酶液。 

測定步驟： 

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 580 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三和試劑四置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μL 標(biāo)準(zhǔn)品，40μL 試劑二，120μL 試劑五，20μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μL 蒸餾水，40μL 試劑二，120μL 試劑五，20μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)空白管。

5. 對照管：取 EP 管，加入 100 μL 蒸餾水，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μL 試劑四，蓋緊后搖勻 1min；加入 20μL 粗酶液，混勻后 8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL，再加入 40μL 試劑二，120μL 試劑五，20μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測光吸收，記為 A 空白管。

6. 測定管：取 EP 管，加入 20μL 粗酶液，100μL 試劑三，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μL 試劑四，

蓋緊后搖勻 1min；8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL，再加入40μL 試劑二，120μL 試劑五，20μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測光吸收，記為 A 測定管。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。

注意事項：試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑 4℃可保存一周。